পেপটাইডের রাসায়নিক সংশ্লেষণের পদ্ধতিগুলির মধ্যে রয়েছে সমাধান-ফেজ পেপটাইড সংশ্লেষণ এবং কঠিন-ফেজ পেপটাইড সংশ্লেষণ। সমাধান-ফেজ পেপটাইড সংশ্লেষণে দ্রবণে অ্যামিনো অ্যাসিডের সংযোগ জড়িত থাকে; এটি সাধারণত একটি C-টার্মিনাল থেকে N-টার্মিনালের দিকে অগ্রসর হয় এবং ছোট পেপটাইডের সংশ্লেষণের জন্য উপযুক্ত (যেমন, 10টিরও কম অ্যামিনো অ্যাসিড থাকে)। সাধারণত নিযুক্ত সুরক্ষা কৌশলগুলির মধ্যে রয়েছে BOC (tert{10}}butyloxycarbonyl) এবং Z (benzyloxycarbonyl) পদ্ধতি। এই পদ্ধতিটি সুবিধা প্রদান করে যেমন কম খরচ এবং স্কেলের সহজ-যদিও এটি মধ্যবর্তী পণ্যগুলির বিশুদ্ধকরণের প্রয়োজন করে। ব্যবহৃত প্রাথমিক সংযোগ বিকারক কার্বোডাইমাইড ধরনের (যেমন, DCC); যাইহোক, এগুলি রেসিমাইজেশন পার্শ্ব প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত করতে পারে, যা HOBt-এর মতো সংযোজনের মাধ্যমে দমন করা যেতে পারে।
কঠিন-ফেজ পেপটাইড সংশ্লেষণের মৌলিক নীতির মধ্যে রয়েছে পেপটাইড চেইনের সি-টার্মিনাল অ্যামিনো অ্যাসিডকে একটি কঠিন সমর্থনে (যেমন রজন) স্থির করা। তারপর পেপটাইড চেইনটি ক্রমান্বয়ে প্রসারিত হয় পুনরাবৃত্ত পদক্ষেপের একটি সিরিজের মাধ্যমে যার মধ্যে রয়েছে ডিপ্রোটেকশন, অ্যাক্টিভেশন এবং কাপলিং; সংশ্লেষণের দিকটি সাধারণত C-টার্মিনাস থেকে N-টার্মিনাস পর্যন্ত চলে। নিযুক্ত প্রধান সুরক্ষা কৌশলগুলি হল BOC (tert-butyloxycarbonyl) এবং Fmoc (9-fluorenylmethyloxycarbonyl) পদ্ধতি, Fmoc পদ্ধতি এর হালকা প্রতিক্রিয়া অবস্থার কারণে প্রভাবশালী পদ্ধতি হিসাবে আবির্ভূত হয়েছে। সাধারণত ব্যবহৃত কাপলিং রিএজেন্ট উভয়ই কার্বোডাইমাইড{15}}টাইপ রিএজেন্ট (যেমন, ডিসিসি) এবং ওনিয়াম লবণ (যেমন, এইচবিটিইউ) অন্তর্ভুক্ত করে। সংশ্লেষণের পর, পেপটাইডকে ক্লিভ করা আবশ্যক-সাধারণত টিএফএ বা এইচএফ-এর মতো বিকারক ব্যবহার করে এটিকে রজন সমর্থন থেকে নির্মূল করতে।
একটি পেপটাইড সংশ্লেষণ পদ্ধতির নির্বাচন পেপটাইড চেইনের দৈর্ঘ্য এবং এর অনুক্রমের নির্দিষ্ট বৈশিষ্ট্যের উপর নির্ভরশীল: কঠিন-ফেজ সংশ্লেষণ উচ্চ দক্ষতা প্রদান করে এবং অটোমেশনের জন্য সহজেই উপযুক্ত, এটিকে মাঝারি-মাঝারি সংশ্লেষণের জন্য উপযুক্ত করে তোলে (-পেপ্টিনো অ্যাসিড, অ্যাসিডের দৈর্ঘ্যের অ্যাপস); বিপরীতভাবে, সমাধান-ফেজ সংশ্লেষণ ছোট পেপটাইড উৎপাদনের জন্য আরও উপযুক্ত। "কঠিন" পেপটাইডগুলির জন্য-যেমন সিকোয়েন্সগুলি একত্রিত হওয়ার প্রবণতা বা বিশেষ অ্যামিনো অ্যাসিডযুক্ত-বিকল্প কৌশলগুলি, যেমন সিউডোপ্রোলিন পদ্ধতি বা *অর্থো*-হাইড্রক্সিবেনজিল-প্রকার সুরক্ষা পদ্ধতিগুলি নিযুক্ত করা যেতে পারে৷